采集方法：

1）用采样拭子采取足够数量的粪便样本（每管保存液采集至少0.2g新鲜粪便样品，最多可保存0.5 g粪便样本）。

2）将带有足够数量样品的采样拭子刷放进装有粪便保存液的小瓶内，并快速搅动十次左右，以洗脱刮刷上样品，然后从尾部推进采样拭子头部，拧紧瓶盖。

4.保存条件：保存液可在常温条件下粪便中宿主与微生物的DNA可保存60天，在-20℃和-80℃下可长期保存。

粪便核酸提取方法：

磁珠法（适用于全自动核酸提取仪）

1）转移600 µl样品（或称取粪便样本180-300 mg）至2 ml离心管中。

2）加入600µlCY1（液体样本不加CY1），15 µL蛋白酶K，使样本均匀分散于溶液中。

3）在70℃加热悬浮液5min（难以溶解的细胞溶解温度可以提高到95℃）

4）12000rpm离心1min，取出全部上清到新的离心管,加10uL磁珠和0.25mLCY2，充分混匀（可用混匀器），放置在磁力架上静置约20s，吸掉液体。

5）加入0.6mLCY3液体，充分混匀（可用混匀器），放置在磁力架上静置约20s，吸掉液体。

6）加入0.6mLCY4液体，充分混匀（可用混匀器），放置在磁力架上静置约20s，吸掉液体。

7）加入0.6mLCY4液体，充分混匀（可用混匀器），放置在磁力架上静置约20s，吸掉液体。

8）将离心管从磁力架上取下短暂离心，之后将离心管重新放回磁力架上，吸干液体。

9）室温干燥5-10min，加50μLCY5液体，混匀；置于65°C空气培养箱培养10min，期间涡旋混匀三次或置于65℃转速1600rpm金属浴中孵育5min； 磁力架上静置约20s，转移液体到新的离心管，测OD。

注：OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液，震荡混匀，室温放置5-10分钟。

吸附柱法

1）转移600 µl样品（或称取粪便样本180-300 mg）至2 ml离心管中。

2）加入600µlCY1（液体样本不加CY1），15 µL蛋白酶K，使样本均匀分散于溶液中。

3）在70℃加热悬浮液5min（难以溶解的细胞溶解温度可以提高到95℃）

4）12000rpm离心1min，取出全部上清到新的离心管, 加入250 μlCY2，此时可能会出现絮状沉淀。盖上管盖并涡旋振荡15 sec，彻底混匀。充分混匀（可用混匀器）。简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。

5） 仔细将离心管中的溶液和絮状沉淀全部转移至吸附柱CR2。

注意：如果吸附柱上的液体未能全部离心至收集管中，请加大转速，延长离心时间至液体完全转移到收集管中。

6） 加入600 μlCY3，12000rpm离心1min。

7） 加入600 μlCY4，12000rpm离心1min。

8） 洗脱液（无DNA酶的水 ddH2O），12000rpm离心1min。

将吸附柱置于一个新的收集管（无DNA酶的 Centrifuge Tube ）中，向吸附柱膜的中间部位悬空加入50μLCY5，室温放置2-5分钟，12000 rpm离心 1分钟，收集核酸溶液。