需要但未提供的试剂和器皿如下：

(1) 二氯甲烷，分析纯

(2) 正己烷，分析纯

(3) 甲醇，分析纯

(4) 去离子水          

(5) 5mL圆底或锥底玻璃离心管

(6) 2ml玻璃进样瓶或者5ml圆底玻璃试管（一次性）

(7) 5mL有机玻璃离心管架（24孔），1个

(8) 17*17*10cm瓷盘，1个

试剂配制

预处理试剂：取1管试剂A，加入到1瓶试剂B中，剧烈震荡使其完全溶解，备用【配制好的预处理试剂呈白色半透明状，于2-8℃保存有效期10天】

1.1预处理

1）称取0.4±0.005g油样于5mL玻璃离心管中，加入0.4mL 预处理试剂混匀；

2）室温静置5min（离心管斜躺在桌面上）

3）加入0.4mL去离子水、1mL正己烷剧烈振荡2min；静置分层约1min（此时可以先活化柱子）

1.2过SPE柱

1）活化：依次采用1mL二氯甲烷、1mL正己烷过柱

2）上样：取1mL上层待净化液加入柱中（见1.1预处理-3））；

3）淋洗：依次用1mL正己烷、1mL试剂C淋洗，最后吹空气3s；

4）解吸：加入1mL二氯甲烷解吸（流速1mL/min），收集全部解吸液于2mL玻璃进样瓶中

5）浓缩及复溶：40℃水浴氮吹干；加入1mL甲醇涡旋15s；取0.1mL甲醇复溶液，再加入

0.1mL样本稀释液涡旋15s

实验前，请将检测试剂盒从2-8℃冰箱中取出，于室内温度20-28℃下平衡1小时！

1）取出平衡后的适量板条，其余放回铝膜袋中；

2）依次：加50μL标准品/样本于相应微孔中；加50μL酶结合物和50μL抗体至所有微孔；

3）盖上板贴，于20-28℃下，孵育20分钟；倒出微孔中液体；

4）将洗涤液注满微孔浸泡15s倒出，重复2次；

5）加100μL底物至微孔中，于20-28℃下，孵育10分钟；

6）加100μL终止液至微孔中，于450/630nm波长下，读数

1）结合率计算公式

其中，

                             B：为i样本或浓度点的结合率；

                             A_i：为i样本或浓度点的吸光度；

                             A₀：为零标准孔的吸光度；

2）建立标准曲线：以标准品浓度的对数为x轴，以其对应的结合率B的logit值为y轴，进行线性拟合

建立标准曲线。将样本结合率（计算见1）中公式）代入曲线方程，即可求出样本中苯并（α）芘的含量。

3）超出检测上限的样本稀释方法

① 将样本前处理步骤“1.2过SPE柱-5）”中0.1mL甲醇复溶液用无水甲醇稀释5倍；

② 将①的溶液，参照说明书采用样稀稀释后点样；

③ 将得出的含量再乘以5，即为最终样本中苯并（α）芘的含量；