吉林高效空气过滤器,细胞培养实验室,高效过滤器--高效空气过滤器在细胞培养实验室相关的技术应用，胚胎干细胞（embryonic stem cells,ES）的体外培养要求增殖的同时保持未分化的状态，因此，我们要进行体外培养胚胎干细胞，必须环境中满足两个条件：细胞生长因子和分化抑制因子。体外培养的成纤维细胞可以分泌细胞生长因子和分化抑制因子，前者可以促进ES细胞的增值，后者可以有效的抑制ES 的自主分化。目前，可以用来制作饲养层的细胞有多种，其中原代小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblast, MEF）取材方便，易于铺层，分泌能力强而成为ES 细胞的饲养层细胞。
将原代培养的MEF 细胞进行传代，多为3－6 代，这样不仅可以使得MEF 细胞高效空气过滤器的纯度较高，而且生长状态也很好。在制备饲养层前将MEF 细胞用丝裂霉素C 或射线照射预处理，抑制DNA 的复制使其在保持分泌功能的基础上失去增值能力，以免与ES 的生长发生竞争。在具体实验中，MEF 细胞的原代分离时胎龄的选择，作为饲养层使用时细胞代数的选择，丝裂霉素处理的浓度都会影响饲养层培养体系的质量。
胎龄过大，则成纤维细胞的成分降低，分离效率低下，且易混杂其他细胞，难以去处。若胎龄过小，胚胎形态小，躯干部分不易分辩，操作困难。细胞代数过多，则出现衰老征象；细胞代数过少，不容易纯化。丝裂霉素的浓度处理和处理时间直接影响细胞的状态。www.rfilter.com
【实验材料】
小鼠（7-8 周龄雌性小鼠 10 只， 4 周龄雄性小鼠20 只）
【实验试剂】
细胞培养液：DMEM-High glucose 4.5g/l+10%胎牛血清+青霉素+链霉素
L-谷氨酰胺2mmol/L
PBS 液
消化液：含0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
冻存液：细胞培养液+10%DMSO
丝裂霉素C 20mg/L
【实验方法与步骤】
1.MEF 的获取高效过滤器
（1）处理小鼠，同期发情和超数排卵（2）2：1 合笼过夜（3）取出有阴道栓
的开始记时间为0.5 天（4）取出妊娠12.5-14.5 天的小鼠为实验材料（5）无菌取
出胚胎（6）去除头、尾、内脏和四肢，仅留躯干部（7）用眼科剪刀剪成1mm3组
织块（8）0.25%胰蛋白酶消化20min/室温，每隔5min振荡一次（9）过滤（200 目
筛网）并收集滤液（含有单个的MEF）
2. 接种并进行原代培养
（1）细胞计数，按照1*105个/ml接种于培养瓶中（2）48 小时换液，4-5 天后传代高效空气过滤器,细胞培养实验室,高效过滤器

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